猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒使用说明书

产品名称

通用名称：猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格

50T/盒

预期用途

本试剂盒利用实时荧光PCR原理，对猪蓝耳病病毒进行定性检测，具有重要的诊断和疗效评估指导意义。

原理

本试剂盒根据猪蓝耳病病毒的高度保守区域设计专门的引物和探针，在含有猪蓝耳病病毒基因组模板的反应体系中，PCR反应能够顺利进行并释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪对PCR过程中的信号进行实时监测和分析，实现结果的定性检测。

试剂盒组成

本试剂盒包含:

• PRRSV RT-PCR反应液：875 μL × 1管
• PRRSV混合酶液：125 μL × 1管
• PRRSV阳性对照：40 μL × 1管
• PRRSV阴性对照：40 μL × 1管
• 说明书：1份

注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪蓝耳靶基因的质粒。

储存条件及有效期

在避光条件下置于-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid Smart Cycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求

1. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品并置于离心管中待检。

2. 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取20g样本，加少量灭菌PBS，在无菌研磨器中研磨至糊状，再用4倍PBS稀释，8000rpm离心10分钟，取上清待检。

3. 避免样本间的交叉污染。

4. 样本可立即检测，若不能可在2-8℃下冷藏过夜，长期保存需置于-80℃以下以避免冻融。

检验方法

1. 试剂准备

（1）从冰箱中取出试剂盒，取出所需试剂，充分融化并瞬时离心除去管壁附着液体。

（2）核算实验需要的反应数（n），根据反应体系计算所需试剂量。

（3）在无菌离心管中加入所需试剂，充分混匀后分装至PCR反应管。

2. 样本准备

使用QIAGEN、Roche公司的RNA提取试剂盒按说明书提取RNA。

3. 加样

在PCR反应样本管中分别加入处理好的样本RNA各5 μL，终体积25 μL/管，混匀后转移到PCR仪器上。同样处理阴性和阳性对照管。

4. PCR扩增

将样本管放置在PCR仪样品槽并记录顺序，根据设置进行PCR扩增。

参考值

试剂盒有效性判定：阳性对照有典型扩增曲线或Ct值≤35，阴性对照Ct值＞38或无Ct值。

检验结果解释

FAM阳性表示样本中检出猪蓝耳病病毒；FAM阴性表示未检出。

产品性能指标

最低检出限为103 Copies/mL，CV值≤3%。

注意事项

使用本试剂盒的实验室应严格按照基因扩增检验实验室管理规范进行管理。处理样本过程中，应在0-4℃条件下操作，避免RNA降解，所有器具需经过无核酶处理。检测后应立即清洁工作台，避免交叉污染。